炎症性皮膚病是一類臨床常見疾病，其病理(lǐ)特征是NLRP3炎症小(xiǎo)體(tǐ)激活所引起的多(duō)種促炎細胞因子釋放，誘導激活先天性和适應性免疫反應。由于NLRP3炎症小(xiǎo)體(tǐ)的激活可(kě)增加免疫相關細胞的糖皮質(zhì)激素抵抗力，因而針對炎症性皮膚病（如銀屑病及特應性皮炎）的臨床治療，常會出現糖皮質(zhì)激素的耐藥問題。鑒于NLRP3炎症小(xiǎo)體(tǐ)在炎症性免疫皮膚病發病機制中(zhōng)的關鍵性作(zuò)用(yòng)，靶向NLRP3炎症小(xiǎo)體(tǐ)以減輕炎症反應，是治療炎症性皮膚病的關鍵。然而，NLRP3炎症小(xiǎo)體(tǐ)主要位于人體(tǐ)皮膚表皮層和真皮層的免疫細胞和角質(zhì)形成細胞内，因此皮膚角質(zhì)層成為(wèi)了靶向NLRP3炎症小(xiǎo)體(tǐ)的天然遞送屏障。

該可(kě)溶性微針貼片以透明質(zhì)酸和膠原三肽為(wèi)可(kě)溶性微針基質(zhì)，針體(tǐ)中(zhōng)包含Cas9核糖核蛋白及地塞米松兩種納米複合物(wù)。首先，作(zuò)者通過聚合物(wù)載體(tǐ)将基因編輯Cas9核糖核蛋白包裹制備成納米複合物(wù)，同時利用(yòng)聚乳酸-羟基乙酸共聚物(wù)（PLGA）包裹地塞米松包制備成納米複合物(wù)；随後，兩種納米複合物(wù)分(fēn)别裝(zhuāng)載于以透明質(zhì)酸及膠原三肽為(wèi)基質(zhì)的微針針體(tǐ)中(zhōng)，即得到可(kě)溶性微針雙載貼片。微針刺入皮膚後可(kě)直接穿透角質(zhì)層到達表皮和真皮層，可(kě)迅速被皮膚組織液降解，同時将兩種納米複合物(wù)從針體(tǐ)中(zhōng)釋放。在聚合物(wù)載體(tǐ)的介導下，Cas9核糖核蛋白可(kě)跨膜轉運至皮下免疫細胞及角質(zhì)層形成細胞内，并對細胞核内NLRP3基因組進行編輯，因而可(kě)以促進糖皮質(zhì)激素地塞米松的治療并降低用(yòng)量。同時地塞米松在其入核的過程中(zhōng)會誘導核孔擴張，從而促進基因編輯核糖核蛋白複合物(wù)進入細胞核，增強NLRP3基因的編輯效率（圖1）。

       由于可(kě)溶性微針貼片的基質(zhì)含有(yǒu)具(jù)有(yǒu)生物(wù)活性的膠原三肽，因此可(kě)以促進皮膚皮損組織的膠原合成，減少經皮失水，促進皮膚損傷的組織修複。通過對微針貼片治療後小(xiǎo)鼠皮損部位的經皮失水流失值和皮膚水化值進行評估，發現不管是空白微針貼片還是載藥微針貼片，經皮失水流失值均大大降低，并有(yǒu)效增加了小(xiǎo)鼠背部皮膚的水合作(zuò)用(yòng)。與市售制劑地塞米松乳膏和他(tā)克莫司軟膏相比，經可(kě)溶性微針貼片治療後，可(kě)顯著改善皮損組織角質(zhì)層的屏障功能(néng)，促進皮膚天然屏障功能(néng)的修複，保持皮膚各層含水量及結構的完整性。

     在小(xiǎo)鼠特異性皮炎和銀屑病兩種炎症性皮膚病模型中(zhōng)，可(kě)溶性微針雙載貼片給藥後，可(kě)對皮下角質(zhì)形成細胞和免疫細胞中(zhōng)的NLRP3基因進行高效編輯，下調NLRP3的表達，并且成功抑制各種異常的先天性和适應性免疫反應來減輕炎症性皮膚病的典型症狀，如劇烈瘙癢、皮膚紅斑、表皮增厚、表皮屏障功能(néng)受損、炎症細胞因子浸潤等。同時NLRP3炎症小(xiǎo)體(tǐ)的下調，減輕了免疫相關細胞的糖皮質(zhì)激素抵抗，有(yǒu)效提高了糖皮質(zhì)激素療法的抗炎敏感性。

       圖2. 可(kě)溶性微針雙載貼片用(yòng)于炎症性皮膚病的治療。（A）小(xiǎo)鼠模型治療示意圖；（B）治療後皮損組織照片（其中(zhōng)G6經微針貼片治療，G7及G8分(fēn)别經地塞米松乳膏和他(tā)克莫司軟膏治療）；（C）治療後小(xiǎo)鼠皮損部位的NLRP3及其他(tā)炎症小(xiǎo)體(tǐ)蛋白的表達量；（D）治療後小(xiǎo)鼠皮損部位的免疫組化照片。

      綜上所述，通過可(kě)溶性微針貼片介導透皮給藥，以實現皮下細胞的基因編輯胞内遞送的分(fēn)級遞送策略，可(kě)有(yǒu)效發揮基因編輯和糖皮質(zhì)激素的協同治療效果。該方法不僅在炎症性皮膚病的治療方面極具(jù)潛力，而且也為(wèi)經皮途徑的基因編輯療法提供了新(xīn)的思路。

該研究由浙江大學(xué)藥學(xué)院平淵團隊獨立完成。